À propos du comptage des cellules

La cytométrie est l'une des différentes méthodes utilisées dans les sciences de la vie pour le comptage cellulaire ou la quantification similaire, y compris médical Diagnostic et traitement. Il s'agit d'un sous-ensemble important de cytométrie et a des applications à la fois dans la recherche et la pratique clinique. Par exemple, une numération sanguine complète peut aider les médecins à déterminer pourquoi une personne se sent mal et comment aider. Le sang, le plasma, la lymphe ou les lavages en laboratoire sont généralement exprimés comme le nombre de cellules par unité de volume, exprimant ainsi une concentration (par exemple, 5 000 cellules par millilitre).

Les usages

De nombreuses procédures biologiques et médicales nécessitent du comptage des cellules.En médecine, la concentration de diverses cellules sanguines, telles que les globules rouges et blancs, peut fournir des informations importantes sur la santé d'une personne.En thérapie cellulaire, la dose de cellules données au patient est contrôlée.De même, la concentration de bactéries, de virus et d'autres agents pathogènes dans le sang ou d'autres fluides corporels peut révéler des informations sur la progression d'une maladie infectieuse et dans la réussite du système immunitaire réagit à l'infection.De nombreuses expériences de biologie moléculaire nécessitent une connaissance des concentrations cellulaires afin d'ajuster les quantités de réactifs et de produits chimiques utilisés dans l'expérience en conséquence.Les études examinant le taux de croissance des micro-organismes (en d'autres termes, à quelle vitesse ils se divisent pour produire de nouvelles cellules) nécessitent un nombre de cellules.Calculez le rapport des cellules mortes aux cellules vivantes comme mesure de la viabilité cellulaire, par exemple les cellules exposées à des substances toxiques.

Comptage des cellules manuelles:

Il existe plusieurs méthodes pour le comptage des cellules. Certaines sont primitives et ne nécessitent aucun équipement spécial, ce qui peut être fait dans n'importe quel laboratoire biologique, tandis que d'autres comptent sur des électroniques sophistiqués.

Comptable:

Les chambres de comptage sont des lames de microscope conçues pour le comptage des cellules. Les cytomètres et les chambres de comptage des chevrons Sedgewick sont deux types de chambres de comptage. Il y a deux petites chambres en forme de grille au milieu du compteur de cellules sanguines, et des glissades de verre spéciales sont posées lors du comptage .Une goutte de culture cellulaire est placée dans l'espace entre la chambre et la lamelle, la remplissant par action capillaire. En regardant à un échantillon au microscope, les chercheurs utilisent une grille pour compter manuellement le nombre de cellules dans un domaine spécifique de taille connue .La distance de séparation entre la chambre et le couvercle est prédéfinie de sorte que le volume de la culture comptabilisée peut être calculé et utilisé pour calculer la concentration cellulaire. La viabilité des cellules peut également être déterminée si un colorant réactif est ajouté au fluide.Ils ont l'avantage d'être peu coûteux et rapides; Cela en fait la méthode de comptage préférée pour des expériences biologiques rapides où il est nécessaire de déterminer si une culture cellulaire se développe comme prévu. La dilution est un inconvénient car chaque dilution augmente l'inexactitude de la mesure.

Placage et CFU Counting:

Pour quantifier le nombre de cellules en culture, les cellules peuvent être simplement plaquées sur des boîtes de Pétri contenant un milieu de croissance. Si les cellules sont réparties efficacement sur la plaque, il peut généralement être supposé que chaque cellule produira une seule colonie ou des unités de formation de colonie (CFU ). Les colonies peuvent ensuite être comptées et sur la base du volume de culture connu distribué sur la plaque, la concentration cellulaire peut être calculée. Cela est généralement effectué selon ASTM D5465.Comme pour les chambres de comptage, les cultures nécessitent souvent une dilution substantielle avant l'inoculation; Sinon, ce que l'on appelle la forme "des pelouses " au lieu de compter les colonies individuelles: des milliers de colonies se chevauchent.Bien que cette méthode puisse prendre du temps, elle permet une estimation précise du nombre de cellules viables (car seules elles sont capables de croître et de former des colonies visibles). Il est donc largement utilisé dans les expériences visant à quantifier le nombre de cellules résistantes à Médicaments ou autres conditions externes (par exemple, test de Luria-Delbrück ou test de protection de la gentamicine) .Additionnellement, l'utilisation d'un compteur de colonie peut grandement faciliter le nombre de colonies sur les plaques d'agar.